El
objetivo de este trabajo fue evaluar la exactitud y la precisión
de la cuantificación de duraznillo negro por microanálisis
del contenido digestivo y de las heces de ovinos en pastoreo en
pasturas polifíticas intoxicados en forma forzada con esta
especie. La exactitud se evaluó analizando si la cantidad
de duraznillo negro suministrada difería de la estimada
en el tracto digestivo y en las heces. La precisión se
estimó por el cálculo de intervalos de confianza
alrededor de la media muestral.
La cantidad de duraznillo negro evaluada (promedio de tres animales)
no difirió (p>0,05) de la suministrada siendo el porcentaje
de recuperación de 97,03%+ 12,06. Los intervalos de confianza
alrededor de la media muestral fueron 81,3 a 112,9 % (probabilidad
90 %) y 78,3 a 117,0 % (probabilidad 95%) Estos resultados indican
que el microanálisis del contenido digestivo de ovinos
permite no sólo confirmar la ingestión de duraznillo
negro en base a la presencia de sus fragmentos en animales intoxicados
en pasturas en las que podrían haber ingerido varias especies
de dicotiledóneas, sino también estimar la cantidad
de esta especie tóxica presente en el tracto con una precisión
de +15,8% alrededor de la media muestral (probabilidad 90%, n=3).
Introducción
El duraznillo negro (Cestrum parqui L=Hérit.) es una especie
de amplia difusión en el país, la que se extiende
desde el Río Colorado hacia el norte (Ragonese y Milano,
1984). Su toxicidad se conoce desde hace mucho tiempo y anualmente
se registran numerosos casos de intoxicaciones en el ganado doméstico
que son mortales u ocasionan afecciones de difícil recuperación
en los animales sobrevivientes (López, Odriozola y Eyherabide,
1991). Esta especie tóxica es una de las de mayor impacto
económico en una amplia zona de producción ganadera
en el país, la que incluye la Depresión del Salado.
En esta zona las muertes por intoxicación debidas a la
ingestión de duraznillo negro ocurren con frecuencia en
animales en pastoreo sobre pastizales, en los que el número
y abundancia de dicotiledóneas es variable según
la comunidad vegetal (León, 1975) y el manejo previo (Sala,
1988) El diagnóstico de las intoxicaciones mortales ocasionadas
por esta especie se basa en observaciones de necropsia e histopatología
hepática.
En muchos casos al realizarse la necropsia se ha iniciado la autólisis
de los órganos, lo que impide o al menos dificulta el diagnóstico
de esta intoxicación (Odriozola, E., com.pers.). En un
trabajo anterior nosotros hemos demostrado experimentalmente que
el microanálisis del contenido digestivo permite confirmar
la ingestión forzada de duraznillo negro, romerillo (Baccharis
coridifolia DC),y sunchillo (Wedelia glauca (Ort.)Hoff.) en ovinos
alimentados con heno de avena y raigrás anual (Yagueddú,
Cid y López, 1998).
Sin embargo, no se conoce si es posible identificar fragmentos
de estas especies tóxicas en el contenido digestivo de
animales en pastoreo en pasturas multiespecíficas, situaciones
en las que la presencia de otras dicotiledóneas haría
más difícil el reconocimiento de dichos fragmentos.
Además, se desconocen la precisión y la exactitud
de las cuantificaciones realizadas por microanálisis, esto
es, en qué medida difiere la cantidad ingerida por el animal
de la cantidad total de la especie tóxica estimada en el
tracto digestivo y en las heces producidas desde la intoxicación,
y cuál es la variación de esta cuantificación
entre animales. El objetivo de este estudio fue establecer la
exactitud y precisión de la cuantificación de duraznillo
negro por microanálisis del contenido digestivo y de las
heces producidas por ovinos intoxicados en forma forzada con esta
especie tóxica y que previamente pastoreaban en una pastura
polifítica.
Materiales y Métodos
En noviembre de 1996 tres ovejas Corriedale (peso promedio = 43,8+5
kg) se mantuvieron durante 8 días en un potrero de 2 ha
de la EEA Balcarce del INTA., en el que estaban representadas
dos comunidades vegetales. Treinta por ciento del potrero correspondía
a un sector de loma dominado por raigrás anual (Lolium
multiflorum L.) y Vulpia dertonensis (All.) Gola y el resto a
un sector bajo dominado por agropiro (Thinopyrum ponticum (Ppodp.)
Barkw. & Dewey).
La disponibilidad fue estimada por doble muestreo (Carrillo y
Fernández, 1988), y la composición botánica
de la vegetación por corte y separación manual de
10 marcos de 0,10 m2. Los marcos fueron distribuidos en forma
estratificada en las comunidades y al azar dentro de cada una
de ellas. Al noveno día las ovejas fueron ubicadas en corrales
individuales e intoxicadas por medio de sonda esofágica
con la dosis letal de duraznillo negro (10 g MS kg-1 PV) (López
y otros, 1991). El material empleado en la intoxicación
fue cosechado a fines de noviembre del mismo año en un
campo ubicado en la zona de Colinas Verdes, Partido de General
Pueyrredón, pcia. de Bs.As., en el que existían
antecedentes de intoxicaciones con esta especie y consistió
en brotes y hojas maduras obtenidos de plantas que se encontraban
en floración.
Para calcular la dosis a suministrar se determinó su contenido
de materia seca (24 h, 60oC). Para facilitar el suministro de
la dosis letal correspondiente a cada ovino, el duraznillo negro
fue parcialmente deshidratado (30 minutos, 60oC) y reducido a
un tamaño de fragmento similar al observado en extrusas
de fístulas esofágicas. Después de la dosificación,
los animales permanecieron en los corrales, con agua ad libitum.
Transcurridas 20 horas desde el suministro de la especie tóxica
las ovejas presentaban signos de intoxicación y fueron
sacrificadas, efectuándose las necropsias. Finalmente se
recolectaron las heces de los corrales.
El microanálisis del contenido digestivo permite estimar
el porcentaje relativo de las especies ingeridas tanto a partir
de una muestra de aproximadamente 45 g MS compuesta por 15 submuestras
obtenidas al azar de diferentes sectores del rumen-retículo,
como de la totalidad del contenido de las restantes regiones (Yagueddú
y otros, 1998). La necesidad de tomar una muestra compuesta en
rumen-retículo obedece al tamaño del contenido de
esta región. Antes de preparar el contenido digestivo para
su cuantificación (lo que implica secado a estufa y molido
sobre tamiz de malla 1mm), las muestras deben ser lavadas con
agua corriente para eliminar el mucus, restos de sangre y otras
sustancias de origen digestivo que pueden coagular al secarse
en estufa impidiendo la dispersión y reconocimiento de
los fragmentos de las muestras.
Por otra parte, para establecer la exactitud y la precisión
de la cuantificación de una especie es necesario expresar
su porcentaje como cantidad (g MS), y comparar esta cantidad con
la cantidad suministrada o ingerida. Esto planteaba un problema
operativo ya que se debía secar el contenido total del
rumen-retículo para estimar su peso seco, pero a la vez
lavar las muestras a analizar por microanálisis antes de
secarlas. Este problema fue resuelto de la siguiente manera:
1) Extracción del contenido de cada región del tracto
y remoción del exceso de agua por ligera presión
sobre un tamiz de 35 mesh (0,5 mm);
2) Pesada de todo el material escurrido;
3) Muestreo del contenido del rumen- retículo de los tres
animales según lo indicado anteriormente;
4) Lavado con agua corriente de las muestras de rumen-retículo,
de los contenidos totales de las otras regiones y de las heces,
sobre tamiz de 50 mesh (0,3 mm);
5) Secado en estufa con circulación forzada de aire (24
h, 60 ºC) y pesada de todo este material;
6) Cálculo del contenido total de rumen-retículo.Con
el material de cada porción del tracto digestivo y de las
heces se realizaron cinco preparados histológicos para
la determinación de su composición botánica
por microanálisis (Sparks y Malechek, 1968). La cuantificación
se efectuó en base a la densidad de fragmentos de cada
especie (número de fragmentos por campo de microscopio
con aumento 100 x) en 100 campos. También se registró
el número de fragmentos no reconocidos, esto es, aquéllos
en los que no se podía determinar si pertenecían
a una dicotiledónea o a una gramínea.
En la cuantificación del duraznillo negro se consideraron
fragmentos epidérmicos que presentaban los tricomas típicos
de esta especie y otros en los que sólo se observaban células
epidérmicas propiamente dichas que presentaban estrías
cuticulares características. Los tricomas de duraznillo
negro son de dos tipos:
1) no glandular uniseriado Bramificado y
2) glandular con cabezuela bicelular. Los porcentajes de duraznillo
negro se corrigieron teniendo en cuenta el porcentaje de fragmentos
no reconocibles en esta especie, y el efecto de la digestión.
Para determinar cómo la digestión ruminal afecta
el reconocimiento de los fragmentos de duraznillo negro, tres
muestras del material empleado en la dosificación fueron
secadas en estufa (24 h, 60EC), molidas sobre tamiz de malla 1mm
y cada una de ellas fue dividida en dos submuestras. Una de las
submuestras fue digerida in vitro, utilizando el procedimiento
de Tilley y Terry (1963), pero reduciendo el tiempo de incubación
con microbios de rumen de 48 a 24 horas, dado que éste
es el lapso en el que la dosis letal produce la muerte de los
animales (López, Spinelli y Villar, 1978). Después
de 24 horas se recobraron por filtrado los residuos húmedos
de digestión. Por microanálisis se estimó
el porcentaje de fragmentos identificables en las muestras digeridas
y en las no digeridas, y los resultados fueron comparados por
prueba de t.
Para cada animal se estimó la cantidad de duraznillo negro
en cada región del tracto digestivo y en heces como el
producto de su peso seco y el porcentaje de la especie tóxica
estimada por microanálisis. Finalmente, la cantidad total
de duraznillo negro en el tracto digestivo y en las heces de cada
animal se expresó como porcentaje de los gramos suministrados.
La exactitud de la cuantificación realizada por microanálisis
se analizó por una prueba de t, evaluando si los gramos
de la especie tóxica estimados diferían de los suministrados.
La precisión de la estimación se evaluó por
el cálculo de los intervalos de confianza (a= 0,05 y 0,10)
alrededor de la media muestral (g de la especie tóxica
estimados). Dichos intervalos representan los rangos dentro de
los que se encontrará el valor de duraznillo negro presente
en el tracto digestivo de los animales intoxicados con 95 y 90%
de probabilidad, respectivamente y fueron expresados como porcentajes
alrededor de la media muestral (n=3).
Resultados
La disponibilidad del potrero en el que pastorearon los animales
antes de ser intoxicados fue de 3335 kg MS ha-1. La biomasa estuvo
representada por un 85 % de gramíneas. Las tres gramíneas
dominantes (Lolium multiflorum Lam., Vulpia dertonensis (All.)
Gola y Thinopyrum ponticum) contribuyeron con el 62% a la biomasa,
en tanto que otras siete gramíneas sumaron un 25%. Dos
ciperáceas (Carex sp y Eleocharis sp) aportaron un 4%,
y ocho dicotiledóneas aproximadamente un 7%. Si bien el
número de especies de dicotiledóneas fue elevado,
sólo una de ellas (Dichondra mycrocalyx (Hall.) Fabris
) tuvo un aporte significativo a la biomasa disponible (5%) en
tanto que el 2% restante correspondió a otras siete especies
(Figura 1).
